流式细胞仪简介？【单细胞转录组】single

流式细胞仪介绍系列 I —— 光谱流式

        流式细胞术已成为分子生物学、医学、免疫学、病理学、植物生物学、海洋生物学等多个研究领域对荧光信号进行高速、灵敏分析的有效方法。仪器制造商已经开发出具有独立信号检测路径的多路激光(355 nm、405 nm、488 nm、561 nm等)流式细胞仪(FCM)。

那我们就盘点一下都有那些新兴的流式细胞仪。-光谱流式 传统的流式细胞术是利用二向色镜和带通滤光片对发出的荧光进行分割和滤除，而频谱流式细胞术是一种检测单个细胞发出的荧光信号的新技术。这一新的光谱- FCM改进了光谱相邻的各种FPs(包括光转换FPs)和多色荧光染料的组合使用，不仅用于免疫系统的研究，而且用于其他研究和临床应用领域。 光谱流式细胞术 是一种基于常规流式细胞术的技术，其中光谱仪和多通道检测器（通常为CCD）代替了常规系统中的传统反射镜，滤光器和光电倍增管（PMT）。

流式细胞仪可以快速进行多参数收集并分析单个细胞或颗粒上的数据。 系列
一.光谱流式原理1.1   索尼发布旗舰级全光谱流式细胞分析仪ID7000™ ，以简便操作流程实现超40色分析        日本东京-索尼公司（以下简称“索尼”）宣布推出旗舰级全光谱流式细胞分析仪ID7000™ ,以精简的操作流程实现同时超40色荧光的多色流式分析。ID7000™搭载索尼创新的全光谱技术，可配备多达7个激光²和188个检测器，允许研究者从混合细胞群体中检测微弱信号和稀有细胞群体，将当今细胞分析技术所能达到的边界大大拓展。

详细参数可参考索尼官网 https://www.sony.com.cn/zh-cn/cms/newscenter/techonology/2019/FY2019-HQ-Technology-2.html 2.Cytek Northern Lights        介绍：一个新的流式细胞仪系统，改变了科学家期望看到的性能范式，从一个负担得起的三激光系统。Cytek北极光采用了与它的姐姐Cytek极光相同的突破性技术。和Aurora一样，它的光学设计和非混合算法给了科学家们极大的灵活性，使他们能够在不为每个应用重新配置系统的情况下，使用大量新的荧光素组合。

最先进的光学和低噪声电子提供了良好的灵敏度和分辨率。平行激光束剖面，结合独特设计的流体系统，转化为突出的性能在高样品流量。详细参数：https://cytekbio.com/pages/northern-lights#tab-overview 光谱流式小故事 流式细胞术从1参数技术转移到30参数技术已经花费了50年的时间。

原因之一是硬件的复杂性。一个平均的12色流式细胞仪将包含12–14个独立的检测器和40多个光学滤镜。考虑当前的30荧光参数仪器的组件。需要32个独立的检测器（加上电源和前置放大器）以及大约50到60多个附加的光学组件-这仅在仪器的发射侧。

如此复杂的仪器的庞大的尺寸，复杂性和制造成本是巨大的。现在可以购买具有50多个参数但价格约为一百万美元的商用流式细胞仪。问题是为什么许多制造商的持续发展方向都集中在传统的多色技术上，而在很大程度上已经过时了？当前的重点是旧的光电倍增管（PMT）技术，旧的过滤器技术，最糟糕的是，旧的补偿技术并未促进流式细胞仪技术的发展。还有一种替代方法可能会超出这些多色仪器的功能，而成本可能仅为其五分之一。

J. Paul Robinson  团队在2004年国际分析细胞学学会（现为细胞学进展学会）的大会上首次提出了功能性光谱流式细胞术 15 ；然后， J. Paul Robinson 在同年的光子学出版物中介绍了光谱流式，随后在2007 年向普渡大学授予了专利。当时，该方法的原理是使用连接到色散元件的32通道PMT阵列。硬件组件减少到只有几个光学元件和一个检测器阵列。向全世界，推广这项技术，并写了NIH赠款，以获取发展光谱流式细胞术技术的资金。

 2011年，索尼获得了普渡大学（Purdue University）的光谱技术专利许可，并致力于开发光谱流式细胞仪。在几年之内，一些出版物证明了> 10色光谱流式细胞术。光谱细胞术随后实现了超过20种颜色的流式细胞术，使用光谱解混具有出色的结果。

确实，光谱流式细胞仪的真正目标是将我们的注意力从信号强度转移到光谱特征作为最重要的参数。长期以来，我们一直将“亮度”视为信号的最重要特征，因此我们忽略了频谱特征的力量。光谱流式细胞仪可以分析无法通过多色流式细胞仪充分分离的荧光染料，这一点非常相关。

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【单细胞转录组】single Cell？不仅仅是10X——FCM简介

最近在看单细胞方面的文献（例如  The bone marrow microenvironment at single-cell resolution ）时，总是时不时的出现流式细胞仪细胞术（FCM）的图，而在google搜索single cell的时候也总是出现流式细胞仪相关的介绍。那么流式细胞仪细胞术到底是什么？它对于我们做单细胞方面的研究到底有哪些帮助呢？我们到底怎样解读流式细胞仪的结果呢？这一切的答案都要求我们对流式细胞仪有一个基本的了解。

FCM在细胞生物学、肿瘤学、免疫学的单细胞水平的研究中其中重要的作用。那么我们先看看 免疫表型分析的应用 1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态 例如仅仅根据fsc/ssc就可以区分外周血中的淋巴细胞,单核细胞,中性粒细胞.免疫发生异常时，就能导致机体免疫紊乱并产生病理变化。FCM可以同时检测一种或几种淋巴细胞表面抗原，将不同的淋巴细胞亚群区分开来，并计算出它们相互间的比例，通过对病人淋巴细胞各亚群数量的测定来监控病人的免疫状态，并指导治疗）。 例如，通过对淋巴细胞流式检测，可以检测在不同条件下，各种类型细胞比例的变化。

比如 用流式检测细胞凋亡 ～～～ 流式细胞术的特点是： 1.检测对象：单细胞悬浮液或生物颗粒 2检测参数：多参数 3.检测特点：单细胞水平 4.检测速度：高速（上万个细胞/s） 5.检测结果：精度高，准确性好 知道了流式的特点，那么 流式细胞仪检测细胞参数的原理 都有哪些呢？ 流式细胞仪根据细胞的特性，将光信号转变为电信号，最终转换为数字信号（如下图） 而光信号的核心在于， 前向散射光FSC和侧向散射光SSC ，实验中常常采用FSC和SSC来区分细胞群体，并去除碎片，死细胞，粘连细胞的干扰。 那么再做流式或者看到文献中流式的结果时，坐标轴的意义是什么？我们如何解读？ FCM结果的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种。由数据还可以做出标准曲线进行定量分析。

首先二维图： 在二维图的中，横坐标 / 纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，可以是线形（line）或者对数（log）。双参数图可以将样品细胞群分开，从而方便对感兴趣的细胞进行分析。 其次单参数直方图 每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布，以直方图的方式来显示。

在图中，横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，其单位是道数（channel），可以是线形（line）或者对数（log）。纵坐标一般是相对细胞 / 粒子数（count）。

流式与westen在检测蛋白表达方面各有什么优缺点？

流式细胞仪当然可以检测细胞内蛋白，这一点，并不是很难，当然要比检测细胞表面抗原复杂些，好在都已经有现成的方法，不成问题。不过流式的应用原理主要还是抗原和抗体反应和western、免疫组化没有本质差别，但是由于免疫组化和western都有酶催化底物的放大体系，因此， 流式不适合检测低表达的蛋白，低表达的还是采用western（尤其是化学发光底物更佳）和免疫组化更好。

流式检测时要求有抗体，可以是直接标记或简介标记的荧光抗体。细胞需要预先固定处理，常用的是多聚甲醛、TritoonX－100、75％乙醇等，具体步骤可参考相关文献，都有详细说明。

流式抗体染色不避光会怎样

流式抗体荧光标记搭配主要由3个因素决定的：流式细胞仪能检测多少个通道需要同时检测检测多少个指标厂家的抗体有多少种荧光标记如果流式细胞仪的通道越多，那么同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多A、 如何根据流式细胞仪搭配流式抗体1） BD流式细胞仪 BD流式试剂选择及应用的相关问答与简介流式细胞仪能检测多少个通道是由有多少根激光决定的以及每根激光的功能决定的，所以首先需要注意两点：流式细胞仪有哪些激光。比如标配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL
1.FL
2.FL3三个荧光通道/三个颜色，而选配的Calibur (FACSCalibur的简称)配有488nm和635nm两根激光，可以检测FL1-FL4四个通道/4个颜色。

Calibur第3通道能检测的PerCP-Cy5.5在FACSAria上是第4通道检测。

南京红十字医院的细胞治疗

治疗中心位于医院门诊二楼，是医院重点建设学科，中心整体医疗技术、科研水平在国内极具优势，是国内较早从事干细胞临床研究的单位。 　细胞治疗中心实验室，是省内规模较大的、高标准的GMP综合性实验室，主要开展间充质干细胞和DC-CIK细胞的临床治疗应用和分子生物学 研究等，配备了细胞治疗所用的最新一代流式细胞仪、电泳仪、PCR仪及美国进口恒温离心机、荧光显微镜和倒置显微镜、低温冰箱、CO2培养箱以及治疗所用 的各种医疗器械等。

我中心细胞治疗技术，是将干细胞和免疫细胞移植治疗领域由血液系统疾病拓宽到非血液系统疾病，在国内乃至国际属先进水平。中心开展的细胞治疗，细胞来源于患者自体，不存在排异反应，手术安全性高，患者耐受治疗，易于接受，其真正价值在于挽救患者生命并改善生存质量。治疗中心为每个患者制订一整套个性化的治疗方案，开展的干细胞移植治疗神经系统疾病、下肢缺血性疾病、股骨头坏死、糖尿病、肝硬化、自身免 疫系统疾病、肌萎缩性侧索硬化症、脑、脊髓损伤、脑梗塞等，DC-CIK细胞肿瘤生物治疗，收到了良好的效果，有效率和显效率居国际国内领先水平。治疗中心设置了标准的净化层流病房，用于干细胞和免疫细胞治疗，病房设施齐全，为患者提供人性化的治疗服务，丰富患者文化娱乐生活，为患者营造家庭般的温馨感觉!尖端的医疗设备 精湛的医疗技术该院巨资引进国际最为先进的干细胞治疗技术、积极开展多领域、多渠道的交流合作，不断引进新理论、新技术，促进该院整体的医疗水平的不断提高。

同时该院独家发布“干细胞治疗结合技术” 等先进针疗法。在“世界亚太糖尿病学术论坛”上得到了世界各国的多位耳糖尿病域权威专家的广泛赞誉。医院糖尿病专科与国际国内权威医疗研究机构强强联手，开展了糖尿病疾病治疗中心，定期邀请国内知名糖尿病权威专家前来进行技术交流 与合作，世界顶尖科研机构和专业公司进行合作，使南京红十字医院糖尿病诊疗中心率先与国际医疗技术服务接轨。

并经常不定期的邀请国内知名糖尿病权威专家 进行健康讲座和咨询诊疗会诊活动，构建了“以人为本”、“绿色医疗”的和谐医患关系，切实解决了乐广大群众“就医难、看病难”问题，进一步推进我市卫生医 疗事业跃上新台阶。人文的医疗理念体贴的医疗服务医院坚持以“一切源于群众，一切围绕群众”的服务宗旨，倡导“无痛、微创”的国际医疗理念，率先引进国外最先进的干细胞治疗技术 医院管理模式在我科室先行运行。以“人文关怀，诚信医疗”为先导，注重把现代高科技与感动心灵的人文关怀有机结合，全新个性化和人性化的特殊医疗服，顺应 了现代城市追求医疗服务的要求。

患者至上：将患者利益放在首位，充分尊重患者的人格与尊严、尊重患者的个人隐私与知情权，充分体现对患者的尊重、理解和关怀。人文服务：视患者为亲人，营造高品位的人文关怀，从患者舒心、方便、安全、满意的服务出发，倡导“一医一患一护”的绿色护理，创建绿色诊疗科室。开展网上预约在线挂号模式，开设24小时专家咨询热线，定期健康回访。

绿色医疗：为患者就诊提供最大方便，实行“无假日门诊”，建立以病人为中心的科学布局和便捷就医的合理流程，实现全程绿色通道，全力营造舒适、温馨的绿色医疗氛围，建立诚信、理解、和谐的医疗环境。

青岛市传染病医院的简介

医院设施青岛市传染病医院暨青岛市第六人民医院始建于1906年，拥有床位400张，设有感染科、肝病科、中医、中西医结合肝病科、血液净化中心、皮肤性病科以及医技职能部门等30多个科室，中医门诊被确定为“国医示范门诊”和“大众绿色医疗定点机构”，中西医结合肝病科被国家中医药管理局确定为“十二五”重点专科建设项目，肝病科及中西医结合肝病科均被评为青岛市卫生行业重点学科。山东中西医结合学会传染病专业委员会及青岛市医学会传染病学与寄生虫病学分会挂靠我院。

医院拥有400多名专门从事传染病临床和研究工作的专业技术人员，荟萃了一批肝病及传染病领域著名专家教授。现有高级专业技术职称60余人，硕士研究生导师10人，其中中西医结合专业硕士研究生导师3人，博士5人，硕士75人，并拥有省内首位“南丁格尔”奖章获得者李桂美同志为代表的精干护理队伍。医疗设备先进并不断完善更新。分子生物学PCR实验室是省内首批、青岛市第一家获国家卫生部《技术验收合格证书》的临床基因扩增检验实验室。

蛋白电泳仪、生化仪OLYMPUS AU-2700，电化学发光测定仪罗氏E60
1.化学发光仪MAGLUMI 2000、流式细胞仪、螺旋CT、DR、彩超、肝纤维化扫描仪等先进诊疗设备为新技术的实施提供强大的支持力。2014年5月医院新开展了口腔科门诊，中医门诊（主要为风湿免疫方向）。